ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ PCR ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ತತ್ವ

ಪಿಸಿಆರ್, ಇದು ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಆಗಿದೆ, ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ವೇಗವರ್ಧನೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗೆ ಡಿಎನ್‌ಟಿಪಿ, ಎಂಜಿ2+, ಉದ್ದನೆಯ ಅಂಶಗಳು ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆ ವರ್ಧನೆಯ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಪೋಷಕ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಆರಂಭಿಕ ಹಂತವಾಗಿ ಬಳಸುತ್ತದೆ , ಡಿನಾಟರೇಶನ್, ಅನೆಲಿಂಗ್, ಎಕ್ಸ್‌ಟೆನ್ಶನ್ ಇತ್ಯಾದಿಗಳ ಹಂತಗಳ ಮೂಲಕ, ಪೋಷಕ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಪೂರಕವಾದ ಮಗಳು ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಪ್ರತಿರೂಪಿಸುವ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗುರಿ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ.

1. ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ PCR

ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಪಿಸಿಆರ್‌ನಲ್ಲಿ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರಾರಂಭದ ಸಮಯವು ಪಿಸಿಆರ್ ಯಂತ್ರವನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ಯಂತ್ರಕ್ಕೆ ಹಾಕಬಾರದು ಮತ್ತು ನಂತರ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ವರ್ಧಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುತ್ತದೆ.ಸಿಸ್ಟಮ್ ಕಾನ್ಫಿಗರೇಶನ್ ಪೂರ್ಣಗೊಂಡಾಗ, ವರ್ಧನೆಯು ಪ್ರಾರಂಭವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಮತ್ತು ಬಿಸಿ-ಪ್ರಾರಂಭದ PCR ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು.

ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಎಂದರೇನು?ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ನಂತರ, ಕಿಣ್ವ ಪರಿವರ್ತಕವು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಆರಂಭಿಕ ತಾಪನ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಅಥವಾ "ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್" ಹಂತದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 90 ° C ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು) ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಿಖರವಾದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಸಮಯ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನವು ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಮತ್ತು ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳ ಸ್ವರೂಪವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.ಈ ವಿಧಾನವು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು, ಅಫಿನಿಟಿ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ರಾಸಾಯನಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳಂತಹ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ.ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುವುದರಿಂದ, ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ತ್ಯಾಗ ಮಾಡದೆಯೇ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಬಹು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಬಿಸಿ ಪ್ರಾರಂಭ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಉತ್ತಮ ಅನುಕೂಲವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.

2. RT-PCR

RT-PCR (ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ PCR) ಎಂಬುದು mRNAಯಿಂದ cDNA ಗೆ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್‌ಗೆ ಒಂದು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸುತ್ತದೆ.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ ಮೊದಲು ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಅಥವಾ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುವುದು, ಒಲಿಗೊ (ಡಿಟಿ) ಅನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್‌ನಂತೆ ಬಳಸುವುದು, ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಮತ್ತು ನಂತರ ಗುರಿ ಜೀನ್ ಪಡೆಯಲು ಅಥವಾ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಬಳಸುವುದು.

3. ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ಪಿಸಿಆರ್

ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR (ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR,RT-qPCR) ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಸಂಪೂರ್ಣ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನೈಜ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲು ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಸಿಗ್ನಲ್‌ಗಳ ಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ qPCR ವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿ SYBR ಗ್ರೀನ್ I ಮತ್ತು TaqMan ಸೇರಿವೆ.

4. ನೆಸ್ಟೆಡ್ PCR

ನೆಸ್ಟೆಡ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಎರಡು ಸುತ್ತುಗಳ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಎರಡು ಸೆಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎರಡನೇ ಸುತ್ತಿನ ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನವು ಗುರಿಯ ಜೀನ್ ತುಣುಕು.

ಮೊದಲ ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ (ಔಟರ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು) ಅಸಾಮರಸ್ಯವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಕಾರಣವಾದರೆ, ಅದೇ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಎರಡನೇ ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಗುರುತಿಸುವ ಮತ್ತು ವರ್ಧಿಸಲು ಮುಂದುವರಿಯುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯು ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಎರಡನೇ ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಂದ ವರ್ಧನೆ, ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಎರಡು ಸುತ್ತುಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಒಂದು ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ ಅದು ಸೀಮಿತ ಆರಂಭಿಕ ಡಿಎನ್‌ಎಯಿಂದ ಸಾಕಷ್ಟು ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

5. ಟಚ್‌ಡೌನ್ ಪಿಸಿಆರ್

ಟಚ್‌ಡೌನ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಎನ್ನುವುದು ಪಿಸಿಆರ್ ಸೈಕಲ್ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವ ಒಂದು ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.

ಟಚ್‌ಡೌನ್ PCR ನಲ್ಲಿ, ಮೊದಲ ಕೆಲವು ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಗರಿಷ್ಠ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ (Tm) ಗಿಂತ ಕೆಲವು ಡಿಗ್ರಿಗಳಷ್ಟು ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಹೆಚ್ಚಿನ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಉಲ್ಬಣಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ PCR ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಮೊದಲ ಕೆಲವು ಚಕ್ರಗಳಲ್ಲಿ, ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿನ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ನ ವಿಷಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರಕ್ಕೆ 1 ° C ಯಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಗರಿಷ್ಠ ತಾಪಮಾನಕ್ಕೆ ಇಳಿಸಿದಾಗ, ಉಳಿದ ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

6. ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್

ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೇ ನೇರವಾಗಿ ಮಾದರಿಯಿಂದ ಗುರಿಯ ಡಿಎನ್ಎ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.

ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್‌ನಲ್ಲಿ ಎರಡು ವಿಧಗಳಿವೆ:

ನೇರ ವಿಧಾನ: ಸ್ವಲ್ಪ ಪ್ರಮಾಣದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು PCR ಗುರುತಿಗಾಗಿ ನೇರವಾಗಿ PCR ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿ;

ಕ್ರ್ಯಾಕಿಂಗ್ ವಿಧಾನ: ಮಾದರಿಯನ್ನು ಮಾದರಿ ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಅದನ್ನು ಲೈಸೇಟ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿ, ಜಿನೋಮ್ ಅನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲು ಲೈಸ್ ಮಾಡಿ, ಸ್ವಲ್ಪ ಪ್ರಮಾಣದ ಲೈಸ್ಡ್ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಅದನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿ, ಪಿಸಿಆರ್ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ.ಈ ವಿಧಾನವು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕೆಲಸದ ಹರಿವನ್ನು ಸರಳಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಸಮಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ DNA ನಷ್ಟವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ.

7. SOE PCR

ಅತಿಕ್ರಮಣ ವಿಸ್ತರಣೆ PCR (SOE PCR) ಮೂಲಕ ಜೀನ್ ಸ್ಪ್ಲೈಸಿಂಗ್ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಸರಪಳಿಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪೂರಕವಾದ ತುದಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ನಂತರದ ವರ್ಧನೆಯ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಸರಪಳಿಗಳ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಮೂಲಕ, ವರ್ಧಿತ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ತಂತ್ರದ ವಿವಿಧ ಮೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಒಟ್ಟಿಗೆ ವಿಭಜಿಸಲಾಗಿದೆ.ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಪ್ರಸ್ತುತ ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ನಿರ್ದೇಶನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ: ಸಮ್ಮಿಳನ ಜೀನ್‌ಗಳ ನಿರ್ಮಾಣ;ಜೀನ್ ಸೈಟ್-ನಿರ್ದೇಶಿತ ರೂಪಾಂತರ.

8. IPCR

ವಿಲೋಮ PCR (IPCR) ಎರಡು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ DNA ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ರಿವರ್ಸ್ ಕಾಂಪ್ಲಿಮೆಂಟರಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ತಿಳಿದಿರುವ DNA ತುಣುಕಿನ ಎರಡೂ ಬದಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಜ್ಞಾತ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ.

IPCR ಅನ್ನು ಮೂಲತಃ ಪಕ್ಕದ ಅಪರಿಚಿತ ಪ್ರದೇಶಗಳ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಜೀನ್ ಪ್ರವರ್ತಕ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ;ಜೀನ್ ಸಮ್ಮಿಳನ, ಸ್ಥಳಾಂತರ ಮತ್ತು ಸ್ಥಳಾಂತರದಂತಹ ಆಂಕೊಜೆನಿಕ್ ಕ್ರೋಮೋಸೋಮಲ್ ಮರುಜೋಡಣೆಗಳು;ಮತ್ತು ವೈರಲ್ ಜೀನ್ ಏಕೀಕರಣವನ್ನು ಸಹ ಈಗ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಸೈಟ್-ನಿರ್ದೇಶಿತ ರೂಪಾಂತರಕ್ಕಾಗಿ, ಬಯಸಿದ ರೂಪಾಂತರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅನ್ನು ನಕಲಿಸಿ.

9. ಡಿಪಿಸಿಆರ್

ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ (ಡಿಪಿಸಿಆರ್) ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಅಣುಗಳ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ.

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅಣುಗಳ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಪ್ರಸ್ತುತ ಮೂರು ವಿಧಾನಗಳಿವೆ.ಫೋಟೊಮೆಟ್ರಿಯು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅಣುಗಳ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ;ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR (ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR) Ct ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ, ಮತ್ತು Ct ಮೌಲ್ಯವು ಪತ್ತೆ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾದ ಚಕ್ರ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ;ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಕ್ವಾಂಟಿಫಿಕೇಶನ್ ಅನ್ನು ಎಣಿಸಲು ಏಕ-ಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದ ಇತ್ತೀಚಿನ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ.